Diferenciación fenotípica, molecular y perfil de sensibilidad antifúngica de Candida albicans y Candida dubliniensis aisladas de pacientes ambulatorios y hospitalizados

Abstract

Las levaduras del complejo Candida albicans son prevalentes en infecciones oportunistas. Candida dubliniensis y Candida albicans son especies estrechamente relacionadas y su diferenciación fenotípica se dificulta por métodos convencionales. Objetivo: Diferenciar fenotípica, molecular y perfil de sensibilidad antifúngica de cepas de Candida albicans y Candida dubliniensis aisladas de pacientes ambulatorios y hospitalizados de diferentes servicios de salud de Asunción, Paraguay. Metodología: Se incluyeron levaduras aisladas de materiales respiratorios, cavidad bucal, orina, sangre y secreciones varias. Los aislamientos subcultivados en agar Sabouraud y agar Cromogénico Candida (CONDA® pronadisa, España), fueron incubados a 35 °C durante 48 h; las colonias de color verde en el medio cromogénico, presuntivo de las especies C. albicans/C. dubliniensis fueron sometidas a la PCR dúplex, utilizando cebadores específicos CAL y CDU. El ADN se extrajo utilizando el kit Wizard® Genomic DNA (PROMEGA) con algunas modificaciones. La sensibilidad a fluconazol, voriconazol, anfotericina B, flucitosina, caspofungina y micafungina se determinó por VITEK® 2 a un subgrupo de aislamientos. Resultados: La PCR dúplex se estandarizó con éxito siendo el límite de detección de 10.10-4 ng/µL. De 1090 aislamientos, 846 (77,6 %) fueron C. albicans y 2 (0,2 %) C. dubliniensis, estos últimos aislados provenientes de cavidad bucal, uno de un paciente inmunocompetente y otro de inmunocomprometido; los 242 restantes fueron negativos para ambas especies. El 95,6 % de 512 aislamientos de C. albicans fueron sensibles a fluconazol, 91,2 % a voriconazol, 99,0 % a anfotericina B, 96,9 % a flucitosina, 100 % a caspofungina y micafungina. Las dos cepas de C. dubliniensis presentaron CIM de ≤ 0,5 µg/mL a fluconazol, ≤ 0,12 µg/mL a voriconazol y ≤ 0,25 µg/mL a anfotericina B. Conclusión: La frecuencia de C. dubliniensis es baja con relación a otros estudios que informan 1,5 a 32 %. C. albicans mostró alta sensibilidad a los antifúngicos. No se obtuvo indicios de resistencia en las dos cepas de C. dubliniensis.