Desarrollo y prueba piloto de un test de PCR múltiple en tiempo real para la detección simultánea de patógenos virales causales de infecciones respiratorias

Abstract

En el Paraguay, más del 20% de los fallecimientos por IRAG, se hallan asociados a virus respiratorios. Esto conlleva a la necesidad de aplicar técnicas moleculares a costo reducido, para aumentar la sensibilidad y detectar otros virus patógenos no reportados por el sistema de vigilancia. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un test in house de qPCR que permita detectar a los seis patógenos virales más frecuentes en las IRAG. Se seleccionaron cebadores y sondas TaqMan® para la detección de AdV, RSV, RV, InfA, EV y MPV en formato de qPCR múltiple. Se testaron diferentes buffers de reacción y enzimas one-step con el fin de optimizar las condiciones de reacción para la detección de los patógenos en muestras biológicas (hisopado nasal). Se desarrollaron controles positivos del kit, clonando fragmentos de PCR de cada virus en plásmidos pJET1.2 y posterior transformación de E. coli. Se realizaron pruebas de reacción cruzada individuales y múltiples.