Construcción de fagos filamentosos transportadores de un sistema Crispr-Cas9 contra el virus del Herpes simplex tipo 1.

Abstract

La Organización Mundial de la Salud estima que dos terceras partes de la población mundial menor de 50 años está infectada por el virus del Herpes simplex tipo 1 (HSV1). El HSV-1 es capaz de infectar las neuronas de los mamíferos, en la cual ingresa en estado de latencia de por vida o pueden reactivarse ante eventos de estrés, lo que conlleva a la replicación del material genético viral y la consecuente producción de nuevos virus infectivos. Los antivirales actualmente disponibles no son capaces de eliminar los herpesvirus latentes y cepas resistentes a las drogas de primera elección. Debido a ello es necesario buscar nuevos fármacos o estrategias capaces de eliminar la latencia y la producción de nuevos virus en las células infectadas. Una de las estrategias actualmente utilizadas es la terapia génica, basada en el sistema CRISPRCas9. Sin embargo, actualmente los vectores virales y no virales utilizados para la administración de los componentes del sistema presentan ciertos retos. Ante esta situación, los vectores virales como los bacteriófagos filamentosos, ofrecen ventajas: no se integran en el genoma de las células eucariotas, son estables, seguros, se los puede modificar genéticamente, poseen mayor capacidad de empaquetamiento de genoma y son fáciles de producir. En este trabajo se construyeron bacteriófagos filamentosos recombinantes transportadores de un sistema CRISPR-Cas9 con gRNAs únicos y dobles, capaces de inhibir el ciclo viral del HSV-1. Los fagómidos desarrollados fueron evaluados mediante transfección e infección con HSV-1 de las células HEK293T, observándose que independientemente al número de gRNAs, el sistema CRISPR-Cas9 fue capaz de inhibir la producción de nuevos HSV-1. Los vectores derivados del fago M13 fueron capaces de empaquetar fagómidos de hasta 9290 pares de bases (pb) y un rendimiento de 1011 a 1013 VGC/mL.