Producción de un bacteriófago recombinante transportador de un péptido inmunogénico del virus de la fiebre aftosa y evaluación de la respuesta inmune en ratones inmunizados

Abstract

La fiebre aftosa (FMD, por sus siglas en inglés) es una enfermedad que afecta a animales domésticos y silvestres de pezuña hendida y es causada por el virus de la fiebre aftosa (FMDV). Esta enfermedad genera grandes pérdidas económicas en el sector ganadero, principalmente en países como Paraguay. Las vacunas anti-aftosa actuales presentan algunas limitaciones, tales como dificultad en su producción y purificación, requerimientos estrictos de cadena de frío, corta duración en la protección, entre otras. Ante este escenario, el objetivo de este trabajo fue producir fagos filamentosos recombinantes (M13-GHL) que expresen, acoplado a la proteína pVIII de la cápside viral, el epítopo inmunogénico GHL (GH loop) de la proteína VP1 y evaluar la respuesta inmune en ratones inmunizados con el mismo. Se obtuvieron fagos recombinantes, con el péptido GHL expresado en la superficie del fago y este péptido fue reconocido por un anticuerpo anti-FMDV, sugiriendo una conformación nativa. Además, la inmunización de ratones con 1x1012 fagos, fue segura y logró inducir respuesta inmune tanto humoral como celular contra el FMDV. La respuesta de anticuerpos, evaluada por ensayo de ELISA, se caracterizó por un predominio de anticuerpos IgG1 por sobre IgG2a, lo que sugiere una respuesta del tipo Th2 predominante. Con respecto a la respuesta inmune celular, se observó la proliferación de esplenocitos de ratones inmunizados con M13-GHL específica contra FMDV. Como conclusión, estos resultados en conjunto demuestran el potencial de los fagos filamentosos recombinantes como alternativa para la producción de vacunas contra el FMDV.

Foot and mouth disease (FMD) is a cloven-hoofed disease that affects domestic and wild animals and is caused by the foot-and-mouth disease virus (FMDV). This disease generates great economic losses in the livestock sector, mainly in countries like Paraguay. FMD vaccines present some limitations, such as difficulty in their production and purification, strict cold chain requirements, short duration of protection, among others. Given this scenario, the objective of this work was to produce recombinant filamentous phages (M13-GHL) that express, coupled to the pVIII protein of the viral capsid, the immunogenic epitope GHL (GH loop) of the VP1 protein and evaluate the immune response in mice immunized with the same. Recombinant phages were obtained, with the GHL peptide expressed on the surface of the phage and this peptide was recognized by an anti-FMDV antibody, suggesting a native conformation. In addition, the immunization of mice with 1x1012 phages was safe and produced both humoral and cellular immune responses against FMDV. The antibody response, evaluated by ELISA assay, was characterized by a predominance of IgG1 antibodies over IgG2a, suggesting a predominant Th2-type response. Regarding the cellular immune response, the proliferation of splenocytes of mice immunized with M13-GHL specific against FMDV is found. In conclusion, these results together show the potential of recombinant filamentous phage as an alternative for the production of vaccines against FMDV.